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Les échantillons tels que les pus, les urines sont généralement polymicrobien. Il est donc important de séparer la bactérie responsable de la pathologie des autres, faute de quoi l'on cultive un mélange de germes ce qui complique l'identification. Cette technique de séparation des bactéries est l'isolement et peut être réalisée au moins suivant deux méthodes (francophone ou trois quadrants et anglophone ou quatre quadrants) possédant chacune des avantages et des limites. L'objectif général visé par la présente étude était d'identifier chaque germe présent dans un inoculum en se basant sur les diverses colonies représentatives obtenues. Les résultats de cette étude montrent que les deux méthodes d'isolement permettent d'obtenir des colonies représentatives de chaque germe mais celle anglophone est la plus efficace car elle permet une répartition homogène des colonies. Ainsi l'identification de chaque colonie représentative est facilement effectuée alors que celles des colonies confluentes sont difficilement résolubles et erronés. Mots clés: Culture bactérienne, laboratoire, colonies isolées